扬州大学/兰州大学第一医院:促进癌细胞死亡新疗法!提高放疗疗效

腾讯网   2023-07-31 17:14:52

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作者:Floyd


(资料图)

导读:放疗是一种重要的肿瘤治疗策略,可直接或间接引起肿瘤细胞的DNA损伤。自噬是一种与DNA损伤相关的生理过程。

线粒体自噬是自噬的一种形式,它特异性靶向并清除受损的线粒体,从而维持细胞稳态。然而,DNA损伤和线粒体自噬之间的联系尚未完全阐明。我们发现,线粒体自噬作为上游信号,通过下调或过表达线粒体自噬关键蛋白Parkin和BNIP3来增加电离辐射诱导的DNA损伤。增强线粒体自噬基础水平联合X射线照射可减少G2/M期阻滞,显著增加γ-H2AX、53BP1和PARP1焦点在细胞核内的聚集,增强DNA损伤,促进肿瘤细胞的死亡。因此,这种方法延长了携带黑色素瘤的小鼠的生存期。本研究结果有望为提高放疗疗效提供一种治疗方法。

研究背景

01 

DNA损伤与肿瘤的发生、发展密切相关。在DNA损伤应答(DNA damage response, DDR)中,放疗激活了许多信号通路,尤其是涉及PI3 -激酶的信号通路,如共济失调毛细血管扩张症和rad3相关蛋白(ATR)和共济失调毛细血管扩张症突变(ATM)。ATR是一种对丝氨酸和苏氨酸残基具有特异性的蛋白激酶,在检测到DNA单链断裂(SSB)后被激活。当DNA双链断裂(DSB)发生时,丝氨酸/苏氨酸特异性激酶ATM被激活。ATM磷酸化p53并调节p53/Cyclin B1介导的G2/M期阻滞。检查点激酶Chk1和Chk2被ATR和ATM磷酸化和激活,在调节G2期检查点中具有重要作用,可能成为放疗的潜在靶点。在没有外源性DNA损伤的情况下,Chk1激酶被部分磷酸化,并在DNA损伤和复制阻滞[9]后被ATR进一步激活。Chk2在整个细胞周期的正常组织中大量表达。它们在DNA损伤后被ATM激活,这也是辐射诱导Chk2激活的主要途径。

BRCA1在细胞周期的所有阶段以及DNA损伤修复中都发挥作用。ATR和ATM通过多种丝氨酸残基的磷酸化诱导BRCA1的激活。激活后,BRCA1增强ATR/Chk1的激活,并增强照射后的G2期阻滞。53BP1 (p53结合蛋白1)是一种具有Tudor结构域的中介蛋白,它需要定位于DNA损伤的位点。焦点是通过在DNA损伤附近快速募集53BP1来创建的,这是由ATM或ATR介导的DDR信号通路诱导的。此外,Chk1促进BRCA1的磷酸化,这是53BP1正确定位于DNA损伤位点[2]所必需的。在发生双链断裂时,断裂位点发生组蛋白H2AX的丝氨酸139磷酸化(γ-H2AX)。磷酸化γ-H2AX在DSB位点聚集,同时募集多种分子,形成焦点,参与早期DDR。PARP1是聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)家族成员,参与SSB的识别。PARP抑制剂引起不可修复的SSB和复制叉的崩溃。

研究过程

02 

电离辐射抑制细胞增殖

对人胰腺癌细胞株PANC-1和SW1990以及小鼠黑色素瘤细胞株B16和S91进行2 Gy、4 Gy和8 Gy的X射线照射。随着辐射剂量的增加,细胞增殖减少,体积增大,细胞扁平、肿胀。CCK8实验显示,照射48 小时后细胞活力下降。此外,克隆形成率显著下降。照射的所有效应均与剂量有关。接下来,我们检测了Ki67和c-Myc这两种肿瘤细胞恶性程度的标志物,发现不同剂量的电离辐射可以显著降低它们在四种细胞系中的表达。此外,4 Gy X射线照射降低了B16和S91黑色素瘤的细胞核大小和Ki67的表达。因此,电离辐射阻止了肿瘤细胞的增殖。

电离辐射抑制细胞增殖

研究成果

03 

我们得出结论,电离辐射可以引起Parkin/BNIP3介导的线粒体自噬,增强DNA损伤,提高肿瘤细胞的放射敏感性,最终促进肿瘤细胞死亡。我们的发现可以为临床放疗提供新的策略;放射联合线粒体自噬诱导剂可能会取得更好的治疗效果。虽然我们的研究表明Parkin/ BNIP3介导的线粒体自噬可增加电离辐射诱导的DNA损伤,但许多分子机制仍不清楚。Sarkar等声称,ATM-Parkin相互作用对Parkin稳定性很重要。据报道铅(Pb)诱导的线粒体自噬是通过ATM激活PINK1/Parkin通路介导的。因此,在电离辐射的情况下,Parkin和BNIP3是否与ATR和ATM相互作用,或者它们是否通过细胞因子或趋化因子连接,需要进一步的研究。

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